Yo nan lòd yo anpeche kontaminasyon kwa pandan operasyon, kondisyon yo ki prensipal pou konsepsyon li yo, konstriksyon ak jesyon operasyon yo se:
1. konsepsyon laboratwa ak konstriksyon, sekirite sistèm k ap travay oswa pwosedi estanda sekirite pwosedi yo dwe satisfè kondisyon ki nan&aktyèl la quot; Kondisyon Jeneral pou laboratwa biyolojik GG; GB19489.
2. PCR divize an kat zòn fonksyonèl dapre etap travay yo, sètadi zòn depo ak preparasyon reyaktif, zòn preparasyon echantiyon, zòn anplifikasyon, ak zòn analiz pwodwi anplifikasyon. Si yon en tan reyèl fluorescent enstriman ekipe, anplifikasyon ak pwodwi analiz zòn yo ka konbine. Chak zòn fonksyonèl dwe make aklè, ak ekipman ak atik nan diferan zòn fonksyonèl pa dwe melanje.
Ka direksyon an koule lè nan laboratwa a PCR dwe te pote soti an akò avèk depo a reagent ak zòn preparasyon an → zòn preparasyon echantiyon → zòn anplifikasyon → anplifye zòn analiz pwodwi anpeche pwodwi yo anplifye soti nan antre nan zòn nan pre-anplifye ansanm ak koule lè. Li kapab te pote soti nan fason ki pou diminye presyon lè a soti nan depo reyaktif ak zòn preparasyon an → zòn preparasyon echantiyon → zòn anplifikasyon → anplifikasyon zòn analiz pwodwi. Li kapab reyalize pa enstale fanatik echapman, aparèy negatif presyon echapman aparèy oswa lòt metòd posib.
3. Antre nan chak zòn travay yo ta dwe entèdi swiv yon direksyon yon sèl, ki se, depo reyaktif ak zòn preparasyon → zòn preparasyon echantiyon → zòn anplifikasyon → anplifikasyon pwodwi analiz zòn. Yo ta dwe itilize zòn travay diferan (tankou diferan koulè). Travayè yo pa dwe pran rad travay yo lè yo kite chak zòn travay.
4. Yo ta dwe netwaye laboratwa a nan direksyon depo reyaktif ak zòn preparasyon an → zòn preparasyon echantiyon → zòn anplifikasyon → zòn analiz pwodwi anplifye. Diferan zòn eksperimantal yo ta dwe gen pwòp aparèy netwayaj yo pou anpeche kontaminasyon kwaze.
5. Apre travay la fini, yo dwe netwaye zòn travay la imedyatman. Sifas ki nan laboratwa ban la nan zòn travay la ta dwe kapab kenbe tèt avè dezenfeksyon an ak netwaye efè nan pwodwi chimik tankou ipoklorit sodyòm. Irradyasyon iltravyolèt sou sifas ban laboratwa a ta dwe pratik e efikas. Depi distans ak enèji irradyasyon iltravyolèt yo trè kritik pou efè dekontaminasyon an, yo ka itilize yon lanp mobil iltravyolèt (longèdonn 254nm), epi apre travay la fin fèt, li ka ajiste pou li ale nan 60-90cm sou tab eksperimantal la. . Depi pwodwi a anplifye se sèlman yon kèk santèn oswa dè dizèn de pè baz (bp), li se pa sansib a domaj UV, se konsa UV-iradyasyon fragman a anplifye yo dwe iradyasyon pou yon tan ki pi long, de preferans lannwit lan.
Fonksyon yo nan zòn nan depo ak preparasyon reyaktif yo se: preparasyon an nan reyaktif depo, distribisyon an nan reyaktif ak preparasyon an nan melanj lan reyaksyon anplifikasyon, osi byen ke depo a ak preparasyon nan consommables tankou tib santrifij ak konsèy. Materyèl tankou reyaktif estokaj ak bagay pou konsomasyon yo itilize pou preparasyon echantiyon yo ta dwe transpòte dirèkteman nan zòn depo ak preparasyon reyaktif yo, epi yo pa ka pase nan zòn deteksyon anplifikasyon an. Materyèl kontwòl pozitif ak materyèl kontwòl kalite nan twous la pa ta dwe estoke nan zòn sa a, men yo ta dwe estoke nan zòn sa a. Zòn pwosesis espesimèn.
Fonksyon nan zòn preparasyon echantiyon an se: fè ekstraksyon asid nikleyik (RNA, ADN), ak ajoute sou tib reyaksyon anplifikasyon an. Pou operasyon ki gen ladan echantiyon klinik, kondisyon yo pou ekipman pwoteksyon, pwoteksyon pèsonèl, ak espesifikasyon opere pou biyosèpsyon laboratwa segondè ta dwe satisfè. Depi kontaminasyon nan aerosols ka rive pandan melanje echantiyon ak pirifye asid nikleyik, kondisyon presyon pozitif ka etabli nan zòn sa a pou fè pou evite kontaminasyon aerosol nan zòn vwazen yo. Pou evite kontaminasyon kwaze ant echantiyon yo, apre yo fin ajoute asid nikleyik yo dwe teste, tib reyaksyon an ki gen melanj reyaksyon an dwe kouvri. Pou materyèl ki ka enfekte, kouvèti a dwe louvri nan kabinè a sekirite byolojik, epi dwe gen pwosedi ki klè pou manyen echantiyon ak inaktivasyon.
Fonksyon zòn anplifikasyon an se: sentèz ADN, anplifikasyon ADN ak deteksyon. Yo nan lòd pou fè pou evite polisyon ki lakòz aerosol, mache nan zòn nan ta dwe minimize. Li dwe te note ke tout tès reyaksyon tib yo pa dwe louvri nan zòn sa a.
Fonksyon an nan zòn nan analiz pwodwi amplifye se: analiz pi lwen ak detèminasyon nan fragman anplifye, tankou ibridasyon, elèktroforèz anmèdi anzim, denaturasyon analiz likid pèfòmans segondè, sekans, elatriye Pwodwi anplifikasyon asid nikleyè gen divès kalite metòd analiz, tankou metòd sondaj ibridasyon. sou manbràn oswa sou microplates oswa bato (etikèt radyonuklid oswa etikèt ki pa radyo-aktif etikèt), dirèk oswa dijere elèktroforesi agaza jèl, poliacrilamid jèl elèktroforèz, Sid transfè, metòd sekans asid nikleyè, spectrometry mas, elatriye.
Zòn nan analiz pwodwi anplifikasyon se sous prensipal la nan kontaminasyon pwodwi anplifikasyon nan laboratwa a PCR, se konsa yo ta dwe pran swen pou fè pou evite pote pwodwi a anplifikasyon soti nan atik yo ak rad travay nan zòn sa a. Lè w ap itilize metòd la PCR-ELISA detekte pwodwi anplifye, yon machin pou lave plak yo dwe itilize yo lave plak yo, ak likid la dechè dwe kolekte nan 1 mol / L kloridrat, epi yo pa ka vide nan laboratwa a, men yo ta dwe jete lwen nan laboratwa PCR la. Drop. Tip yo itilize yo dwe tou tranpe nan 1 mol / L kloridrat ak Lè sa a, mete yo nan yon sache fatra pou jete selon pwosedi, tankou ensinerasyon. Kòm zòn sa a ka itilize sèten mitasyon jenetik ak sibstans ki sou toksik tankou etiladyom bromid, akrilamid, fòmaldeyid oswa radyonukleid, elatriye, yo ta dwe pwoteksyon nan sekirite nan eksperimantal yo dwe peye atansyon a.